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药典专用高效液相色谱柱需要保护柱吗?

发布时间:2019-05-15 13:47:23 作者: 点击数:

   

 

    液相色谱高效液相色谱柱在使用一段时间后会出现一些常见的故障,如果不能很好地判断和解决,就会影响色谱柱的使用效果,从而影响样品的分析结果。

    高效液相色谱柱常见的几种故障判断及排除方法:

    1。在高效液相色谱(HPLC)的应用过程中,柱压问题是一个值得关注的问题。柱压的稳定性与色谱的峰形、柱效、分离效果和保留时间密切相关。

    1.1压力过高:

    这是使用高性能液相的常见的问题,它指的是压力的突然增加,这通常是流动路径中堵塞的原因。此时,我们应该分段进行检查。

    1首先断开真空泵的入口,此时,PEEK管充满液体,使PEEK管低于溶剂瓶,以查看液体是否自由滴落,如果液体不滴落或缓慢滴落,则溶剂过滤头被堵塞。

    处理方法:

    用30%硝酸浸泡半小时,用超纯水冲洗。如果液体自由滴下,溶剂过滤头正常,再检查;

    2.打开净化阀,使流动相不会通过柱。如果压力没有明显下降,过滤器的白头就会被堵塞。

    处理方法:

    去除滤过的白头,用10%异丙醇超声半小时。如果压力降至100PSI(6.7Bar)以下,过滤白头正常,再检查;

    3拆下柱子的出口端,如果压力不下降,柱子就被堵住了。

    处理方法:

    在缓冲盐堵塞的情况下,用95%的水冲洗,直到压力正常。如果是一些强保留的物质导致堵塞,则要用比现在流动相更强的流动相冲至压力正常。

    如果按照上述方法冲洗压力不会长期下降,则考虑将柱的进出口连接到仪器上,并用流动相冲洗柱。此时,如果柱压仍未下降,只需改变柱口筛板,但一旦操作      不太好,很容易导致柱效下降,所以,尽量少用。

    1.2压力过低

    压力过低的现象一般是由于系统泄漏

    处理方法:

    寻找每个界面,特别是色谱柱两端的界面,并拧紧泄漏。当然,另一个原因是泵进入空气中,但此时往往表现为压力不稳定,突然间高低不一,更严重的是会导致泵无法吸收液体。

    处理方法:

    打开清洗阀,并以3-5mL/min的流速冲洗。如果未使用,请使用专用注射器将气泡从净化阀中抽出,并施加外力。

    2.漂移问题主要包括基线漂移和保留时间漂移。

    2.1基线漂移

    一般来说,当机器启动时,基线很容易漂移,如果使用缓冲溶液或缓冲盐,则需要大约半小时的平衡时间,而低波长(220 Nm)的平衡时间相对较长,但是,如果在实验过程中发现基线漂移,则应考虑以下原因:

   ①紫外灯能量不足。

   解决方法:

   更换新的紫外灯;

   ②柱温波动。

   解决方法:

   控制柱和流动相的温度,检查是否有打开的窗户或冷气机面对柱温箱。

   (3)循环池受污染或含气。

   解决方法:

   用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流槽(好是破坏柱)。如有必要,使用1 N硝酸(而不是盐酸)。

   ④流动相污染、变质或由低品质溶剂配成。

   解决方法:

   检查流动相的组成,并使用高质量的化学试剂和HPLC溶剂。

   样品中的强保留质量(高K值)用馒头峰洗脱,从而显示基线的逐步升高。

   解决方法:

   如有必要,在注射之间使用防护柱。在分析过程中,常用强溶剂对色谱柱进行洗涤。

   探测器没有设置在大吸收波长。

   解决方法:

   将波长调整到大吸收波长;

   (7)流动相pH值调节不好。

   解决方法:

   加适量的酸或碱调至佳pH值;

   2.2保留时间漂移

   保留时间再现是液相性能质量的重要标志。同样,保留时间和保留时间之间的差异不应超过15s,超过半分钟可视为保留时间漂移,因此无法定性。您应该考虑以 下原因:

   ①温控不当。

   解决方法:

调节柱温,检查是否有开着的窗户或空调机对着保温箱。

   ②流动相比例变化。

   解决方法:

检查四元泵的比例阀是否有故障。

  ③色谱柱没有平衡。

  解决方法:

允许有足够的时间在每次运行之前平衡列。

  ④流速变化。

  解决方法:

  重新设定流速。

  ⑤泵中有气泡。

  解决方法:

  从泵中除去气泡。

  2.3峰型异常问题

  峰型问题是液相的主要问题,在做液相过程中,我们就是要变换不同的条件来改善不好的峰型,对于各种各样的异常峰,要区别对待,从主要问题出发,一个一个加以解决。

  ①所有峰均为宽峰。

  解决方法:

  系统未达到平衡;

  溶解样品的溶剂极性比流动相差很多;

  色谱柱尺寸及类型选择不正确;

  色谱柱或保护柱被污染或柱效降低;

  温度变化造成的影响。

  ②所出峰比预想的小。

  解决方法:

  样品黏度过大;进样品故障或进样体积误差;检测器设置不正确,定量环体积不正确;检测池污染;检测器灯出现问题。

  ③色谱图中未出峰。

  解决方法:

  系统未进样或样品分解;

  泵未输液或流动相使用不正确;

  检测器设置不正确;

  针对以上情况成因作相应调整即可。。。

  下一个或几个峰是负峰。

  解决方法:

  流动相的吸收背景较高;进样过程中空气进入空气;样品组分的吸收低于流动相。

  ⑤所有峰均为负峰。

  解决方法:

  信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒;

  光学装置尚未达到平衡。

  ⑥出现双峰或肩峰。

  解决方法:

  进样量过大;样品浓度过高;

  保护柱或色谱柱柱头堵塞;

  保护拄或色谱柱污染或失效;

  柱塌陷或形成短通道。

  ⑦前伸峰。

  解决方法:

  进样量或样品浓度高;

  溶解样品的溶剂较流动。