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液相色谱柱的选择

发布时间:2019-05-16 09:25:50 作者: 点击数:

 

一、硅胶基质填料

1.用于正相层析的固定相通常是硅胶(二氧化硅)和其它具有极性官能团的键相填料,如(NH2,APS)和氰基(CN,CPS)。

由于硅氧烷(SiOH)或其他极性基团在硅胶表面的极性强,所以分离的顺序是基于样品中各组分的极性,即,在极性柱上首先洗去具有较弱极性的组分。正己烷(正己烷)、氯仿(氯仿)、二氯甲烷(亚甲基氯化物)等正己烷(正己烷)、氯仿(氯仿)、二氯甲烷(甲基氯化物)等固定相的极性较正己烷(正己烷)低。

2。反相色谱中使用的填料通常以硅胶为基质,表面官能团相对较弱。反相色谱的流动相通常是水、缓冲液、甲醇、乙腈等的混合物。从色谱柱流出样品的顺序是:强极性组分先被洗掉,弱极性组分保留在色谱柱上更强,而弱极性组分保留在色谱柱上的顺序是:先洗掉强极性组分,再将弱极性组分保留在色谱柱上。

常用的反相填料有C18(ODS)、C8(MOS)、C4(丁基)、C6H5(苯基)等。

2。聚合物填料主要是聚苯乙烯二乙烯苯或聚甲基丙烯酸酯。它们的重要优点是它们可以在1-14的pH值下使用。与硅胶基体上的C18填料相比,该填料具有更强的疏水性。大孔聚合物是分离蛋白质和其它样品的有效方法。现有聚合物填料的缺点是柱效率低于硅胶基填料。

三。高效液相色谱法的其他无机填料和其他无机填料已经商业化,由于其特殊性能,一般仅限于特殊用途。例如,石墨化炭黑正逐渐成为反相色谱柱的填充剂。填料的分离与硅胶基体的烷基键合相不同,石墨化炭的表面是保留的基础,不需要其他的表面改性。一般来说,柱填料的截留能力强于烷基键合硅胶或多孔聚合物填料。石墨化碳可以用来分离某些几何异构体,这种柱可以在任何pH和温度下使用,因为它们不会在HPLC流动相中溶解。氧化铝也可用于高效液相色谱法。氧化铝颗粒具有很强的刚性,可以作为色谱稳定的柱床。它的优点是可以在流动相中使用,pH值可达12。但是,由于氧化铝与碱性化合物之间的强相互作用,其应用范围受到限制,不能得到广泛的应用。新型色谱基质填料也可用于高效液相色谱。只有聚合物涂层多孔氧化锆微球色谱柱被商业化。使用pH1-14,温度可以达到100摄氏度。由于氧化锆填料是近几年才开始研究的,加上实验上的困难,其重要的用途和优点仍在进行中。

目前如何选择填料粒径,已售出1~30μm以上的商品色谱填料粒径,但目前主要采用3、5μm填料进行分析和分离。填料的粒径主要影响填料柱的效率和背压两个参数。粒径越小,柱压越大,柱压的增大限制了粒径小于3μm填料的应用。在同样的选择性下,可以提高塔的效率,但这并不是的因素。如果固定相选择正确,但分离程度不够,则选择较小尺寸的填料是有用的。在相同条件下,3µm填料塔的塔效率比5µm填料塔高出近30%,而3µm柱的背压是5µm柱的两倍。同时,塔效率的提高意味着在相同的条件下,即相同的塔板数或分离容量下,可以选择一个较短的塔,但为了缩短分析时间,可以选择较短的塔长。另外,为了降低色谱柱的压力,可以用低粘度的溶剂作流动相或提高色谱柱的温度,如用乙腈代替甲醇。