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液相色谱柱的安装及使用

发布时间:2019-05-20 11:08:20 作者:

     

     在运输或不使用时,液相色谱柱的末端总是用插头密封的。当色谱柱与色谱仪器系统连接时,首先拆下两端的塞子。请注意,流动相流的方向与柱上标记的方向一致。除非出于特殊原因,如需要将柱倒置以清除在柱入口堵塞的污垢,建议用户在连接柱时遵循柱标的方向。由于色谱柱的连接是整个色谱操作的一部分,如果密封套太紧,或者安装不合适,或者密封套与色谱柱末端不匹配,就可能导致溶液泄漏。按照以下步骤将色谱柱连接到密封的卡套,以将色谱柱连接到HPLC系统:

 (1)第一次使用的管道,请依次在管道上设置管道接头和密封卡,外径为1或16英寸。密封套的宽端应面向管道接头。

  (2)将管道紧密插入色谱柱的连接处,将密封套筒和管道接头向前滑动,将管道接头的螺纹与色谱柱端口的螺纹连接,然后拧紧管道接头。如果管道是聚合物材料,请进入步骤(D);如果是金属管道,请继续(C)。

 (3)将管路推入柱端接头后,用1/4”扳手进一步拧紧拧紧螺母。

  (4)将上述方法应用于色谱柱的另一端。C18柱的液相为甲醇(或乙腈)水溶液。有机硅填料在储存和运输过程中可能会干涸。此时,推荐使用体积为10~20倍的纯有机溶剂如甲醇、乙腈等来活化色谱柱。然后,色谱柱可以使用用户自己选择的流动相进行清洗。流速从0.1 ml/min逐渐增加到所需的操作条件,直到基线稳定。如果柱压力和基线波动很大,这可能是由于气泡进入柱。此时,色谱柱可在较高流速下洗涤2 min,5 min,例如4.6~150 mm色谱柱的流速可达2mL/min。

液相色谱柱使用

液相色谱柱是一种先分离混合物,然后利用液固或不混溶液体之间混合物分配比的差异进行分析和鉴别的仪器。根据固定相是液体还是固体,将液相色谱仪分为液-液色谱(LLC)和液-固色谱(LSC)。现代液相色谱仪由高压输液泵、注液系统、温度控制系统、色谱柱、检测器、信号记录系统等组成。与传统的液相色谱柱相比,具有高效、快速、灵敏的特点。采用液相色谱柱和核洗脱液对高沸点和难熔气体混合物进行分离。用于生物医学、环境化学、石化等部门。在选择液相色谱柱之前,你应该更多地了解你自己的样品和杂质,它们的类型和结构,极性,酸碱性,分子量等等。

(1)样品是极性弱酸性的,C18可以在100%酸性水溶液中检测到,也就是说,色谱柱具有100%纯水,保留了良好的极性化合物。

(2)如果样品的极性太强,或者酸性太强,也可以选择由成都摩尔、液相色谱(亲水色谱)、C18强阴离子对试剂或强阴离子交换柱提供的C18柱(缺点在于离子对试剂的平衡时间长,需要流动相pH更精确。否则,难以重复实验,离子对试剂难以洗掉,而基本上离子对的色谱柱不能再用于其他实验中)(成都摩尔科学仪器有限公司提供的GP-C18色谱柱)

(3)如果样品是碱性的,可以选择高纯硅胶柱(高纯硅胶不含金属杂质和硅胶端封)或一些改良的C18柱(如极性包埋技术或碱失活技术等),这样可以减少碱性化合物的尾随。一般选择中性或偏碱性条件做,因为这会增加碱性样品的保留率。

(4)如果碱性化合物的极性过强,或碱度过强,则液相色谱柱可选用较宽pH值的C18液相色谱柱进行高pH值检测(优点是方法开发简单,但目前采用该技术的色谱柱品牌较少。价格也很高)(Ametyst C18/H柱,由成都摩尔科学仪器有限公司提供)。或液相柱(硅胶柱在反相条件下使用,这也是检测碱性样品的经典方法)。强离子交换柱也可用于C18+强阴离子对试剂或强阴离子交换柱。