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液相色谱柱的清洁方法

发布时间:2019-05-20 13:35:59 作者:

 

高效液相色谱(HPLC)是20世纪60年代后期发展起来的一种分离分析技术,是现代分离和测定的重要手段。自问世以来,它以其分离效率高、分析速度快、检测灵敏度高、沸点高但不能汽化热不稳定的生理活性物质等优点,在生物化学、医学和临床分析等领域得到了广泛的应用。高效液相色谱(HPLC)柱是一种消耗品,随着使用时间的延长或注射次数的增加,色谱峰高减小,峰宽增大或肩峰出现,柱效应减小。需要定期进行彻底的清洗和再生,并且不同的柱清洗方法也不同,例如:

一、反相色谱柱

流动相为甲醇:水=90~10,以甲醇(HPLC级)、异丙醇(HPLC级)、二氯甲烷(HPLC级)等溶剂为流动相,每个流动相依次洗涤。每个流动相通过色谱柱体积不小于20倍。然后用相反的顺序冲洗。

二、正相色谱柱

以正己烷(HPLC级)、异丙醇(HPLC级)、二氯甲烷(HPLC级)、甲醇(HPLC级)等溶剂为流动相,每个流动相分别采用正己烷(HPLC级)、二氯甲烷(HPLC级)、正己烷(异丙醇粘度高)、正己烷(HPLC级)、正己烷(HPLC级)、异丙醇(异丙醇粘度高)、正己烷(HPLC级)、正己烷(HPLC级)、异丙醇(HPLC级)等溶剂作为流动相。以甲醇(HPLC级)等溶剂为流动相。可以减少流量,避免压力。注意不要颠倒溶剂的使用顺序,用甲醇冲洗,然后按相反的顺序冲洗成正己烷。所有流动相必须严格脱水。

三、离子交换色谱柱

长期在缓冲溶液中使用和注入会降低色谱柱的离子交换容量。稀酸缓冲液洗涤可再生阳离子柱,而稀碱缓冲液冲洗可再生阴离子柱。

另外,可溶解柱内污染物的溶剂可用于正、负两个方向的流动相清洗。但是,再生柱的柱效率不能恢复到新柱的水平。如果该列是向后安装的,则可以将其传回,但它可能会导致列中的支持崩溃。如果有必要,尽量不要反向加载色谱柱。