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高效液相色谱仪的衍生化技术

发布时间:2019-06-03 08:50:31 作者:

 

高效液相色谱仪(HPLC)衍生化技术是指普通检测方法不能直接检测或检测低灵敏度物质,并与某些试剂(即衍生试剂)反应,使其形成易于检测的化合物的过程。根据派生方法,可分为柱前派生和柱后派生。

一、柱前衍生化:

柱前衍生化是指将被测物体转换为可验证的导数,然后用色谱柱分离。

这种衍生化可以在线衍生化,即被测物和衍生试剂通过两个输液泵被泵入混合器,立即混合反应,然后进入色谱柱;被测物和衍生试剂可以先反应,然后作为一种样品注入。或流动相可加入衍生试剂,取样后,供试品及流动。相位是直接推导出来的。

二、柱后衍生化:

柱后衍生指的是被测物的分离,然后将色谱柱上的溶液与衍生试剂在线混合,形成可验证的导数,然后引入检测器。根据衍生物的种类,可分为紫外-可见衍生物、荧光衍生物、拉曼衍生物和电化学衍生物。

1、紫外可光见衍生化:

主要研究结果如下:(1)UV衍生物是指有机化合物与具有紫外吸收基团的衍生试剂发生弱或无紫外吸收的反应,形成能被UV检测到的化合物。例如,胺很容易与卤代烃、羰基和酰基衍生物反应。

(2)可见光衍生物有两个主要用途:一是利用过渡金属离子检测过渡金属离子,过渡金属离子与着色剂反应生成有色配合物。用可见光探测螯合物或离子缔合物。第二,用于有机离子的检测。在流动相中加入被测离子的反离子后,形成有色离子对化合物,并对其进行分离和检测。

2、荧光衍生化:

荧光衍生化是指检测受试物与荧光衍生化试剂反应产生的荧光物质。

一些荧光衍生试剂本身没有荧光,但它们的衍生物有很强的荧光。

衍生化技术不仅使高效液相色谱仪分析系统复杂化,而且耗费时间,增加了分析成本。一些衍生反应也需要严格控制反应条件。因此,只有在找不到一种简便、灵敏的检测方法或为了提高分离和检测的选择性时,才考虑衍生化技术。