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高效液相色谱仪过滤操纵要点

发布时间:2019-06-10 11:00:57 作者:

当任何颗粒物进入高效液相色谱仪时,都会被高效液相色谱仪色谱柱入口处的筛板堵塞。结果表明,高效液相色谱仪色谱柱堵塞的主要原因是系统压力增大,高效液相色谱仪色谱峰畸变。因此,有必要采取各种预防措施,包括商品仪表本身的操作步骤和各种过滤器设计,防止或减少颗粒物进入HPLC系统,从而延长仪器和色谱柱的使用寿命,提高数据的可靠性。在高效液相色谱仪中,微粒物质主要有三个来源:活性相、被测样品和仪器系统部件的磨损。

1、被测样品

液相系统中的第二个粒子源是被测样品。一些实验室在将所有样品放在自动或手动注射托盘上之前,通过0.45m注射器过滤器过滤所有样品。这是从被测样品中去除颗粒的一种有效方法。但是这个过程也需要注意:当你使用注射器过滤器时,你不能通过过滤器得到100%的被测样品,而且总有或多或少的损失。损失主要来自滤膜的吸附、滤池过滤颗粒的吸附、注射器与注射器连接的泄漏等。如果丢失,被测物质在过滤液体中的含量或浓度是否与原始样品溶液的含量或浓度相同?这个问题通常需要通过实验来证实。确认此步骤是为了增加工作量和成本。使用过滤器是一种消耗。每台过滤器的价格从几元到十几元不等。然而,在分析食品中的残留物时,由于基质大多是复杂的,过滤已成为不可缺少的一步。在实际的分析工作中,每组样本都要用外部标准、增加的回收率或质量控制样本进行测试,这样只要最终检测得到的信噪比能够满足检测极限要求,这一步骤就可以看作是一个系统的误差而忽略不计。

2、活动相

如果活性相是由高效液相色谱仪溶剂组成,则不需要过滤活性相。这是由于高效液相色谱仪的有机溶剂,例如乙腈、甲醇等,在制造的工艺过程中都已经过了0.2m微孔滤膜过滤。同样,无论您是购买高效液相色谱仪水还是在实验室使用超纯水净化系统,最后一步都是通过0.2米的微孔膜。然而,如果固体,如磷酸盐,添加到任何缓冲区,活跃相过滤将是一个必要的步骤。虽然缓冲盐可能是可溶的和高纯,但它们可能含有颗粒物。例如,当试剂瓶的塑料内盖被盖上时,塑料盖和瓶口边缘被挤出时会产生塑料颗粒。在这种情况下,添加的固体可能完全溶解,但活性相中存在少量杂质颗粒,并成为残渣。

通过0.45m微孔膜进行活性相过滤是去除活性相中所有微粒的有效方法。也可使用0.2m微孔过滤膜,但在此应用中,其效果不超过0.45m微孔过滤膜,过滤速度较慢,尤其是实验室使用的试剂和水质量不好时。建议实验室在制定其活性相制备(SOP)的标准操作规程时,应加以规定,以便借鉴类似实验室的国际规范,即:

仅使用高效液相色谱仪时,活性相的制备不需要过滤,相反,所有活性相成分在使用前都必须过滤。

在连接储液瓶和泵的输液管末端使用沉滤器(通常由两种材料制成:熔融玻璃砂芯滤板和微孔金属)也很重要。过滤器的尺寸为10M微孔材料,不能替代活性相过滤步骤,但可以清除系统内的灰尘,保证储瓶和输液管的可靠性。

3、仪器系统部件的磨损物

最后,高效液相色谱仪中微粒物质的另一个主要来源是输液泵密封垫和取样阀旋转轴的磨损。输液泵垫片的磨损和更换有两种不同的建议。

建议一般实验室输液泵垫片的使用寿命一般为6个月至1年。因此,建议半年或一年更换这些垫圈。实验室应根据上述观点制定定期预防性维护计划。这种观点认为,更换垫片的成本低于输液泵垫片颗粒堵塞柱和更换新塔的费用。有些输液泵有玻璃砂芯或筛网,可以过滤流道中泵密封垫磨损的颗粒,防止这些颗粒以活性相流到塔头。如果您有这样的设备,请参阅输液泵操作手册,并检查该过滤器的清洁或更换之间的推荐间隔。

另一个建议是,原垫片的密封效果最好,更换后容易造成活性相泄漏。因此,只要没有泄漏,就不容易更换垫圈。

这两种说法都有其自身的原因。建议与仪表公司的工程师就如何操作进行沟通。不同公司的工具仍然存在一些差异。

自动采样器的转轴密封会随着时间的推移而磨损,但根据我的经验,即使是高负荷的转轴垫圈也可以使用几年。如果您的自动采样器系统具有计数喷油阀旋转次数的功能,您可以设置一个警铃,提醒您何时达到预设阀的旋转次数。据说喷油器旋转了20000次,只有10000个样品,但这似乎不是实验室所涉及的常规样品分析的使用寿命,它们的实际使用寿命将更长。当旋转轴的密封件磨损时,会泄漏。其显著特征是重复注射后同一产品的峰面积值变化很大(rsd?5%)。当然,输液泵的垫片和旋转轴磨损的垫片会增加运动阶段的磨料,加速这些部件的损坏。此外,如果你有缓冲盐,如磷酸盐缓冲盐,在日常活动中,垫圈的磨损会更快。

无论粒子从哪里来,它们都应该从实验中去除。建议在高效液相色谱仪中使用0.45或0.5米的在线多孔过滤器,连接自动采样器和色谱柱,即使使用了保护色谱柱。这种在线过滤器将作为挡板而不是柱状过滤器,如果使用玻璃砂芯过滤器,它将是廉价的,易于更换和更换(在几分钟内)。如果使用在线过滤,则在使用高效液相色谱仪检测每批样品之前记录压力值。当压力上升到一定值时,如25%或500psi,应更换玻璃芯滤板,清洗几分钟后系统将恢复到原来的压力值。