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高效液相色谱仪的优点和常见问题

发布时间:2019-06-15 09:56:24 作者:

高效液相色谱(HPLC)的主要优点是:(1)分离度高于其他色谱方法(2),速度快,可完成10分钟到几十分钟; (3)重复性高; (4)高效相色谱柱可重复使用; (5)自动化操作,高度分析。根据溶质分子与固定相在分离过程中相互作用的差异,高效液相色谱仪可分为四种基本类型,即液 - 固色谱,液 - 液色谱仪,离子交换色谱仪和尺寸排阻色谱。高效液相色谱仪广泛用于生物领域,用于分离和鉴定下列产物:(1)氨基酸及其衍生物; (2)有机酸; (3)类固醇; (4)生物蝶呤; (5)抗生素; (6)糖类; (7)卟啉;核酸及其降解产物; (9)蛋白质,酶和多肽; (10)脂质等。高效液相色谱仪的常见问题是:

1。涡流扩散

流动相撞击较大的固体颗粒,就像水流撞击石头产生涡流一样。如果柱不均匀充填,有些部分松动或有细沟,流动阶段快;在有些部分,如果部件集中或紧密堆积,流动缓慢,多个流动路径又快又慢,它扩大了区域。因此,固相载子粒子应小而均匀,加载柱应松散而均匀,使涡流扩散小,柱效率高。

2,分子扩散(Moleculardiffusion)

分子扩散是物质分子从高浓度区向低浓度区的运动,又称垂直分子扩散。为了减少分子扩散,需要小而均匀的固相粒子。同时,如果流速过慢,分离物料停留时间过长,扩散严重。

三。质量转移

分离的物质在流动相和固定相中平衡,形成较窄的区域。在高效液相色谱仪,溶质分子在两个液相之间分配或在固相上吸附和解吸需要一定的时间。当流速很快时,传递速度很慢,到达平衡阶段向前移动为时已晚。物质的非平衡运动使区域变宽。

4、动相流速

当流速过低时,分子扩散严重,特别是在气相色谱中。如果绘制出理论塔板高度对流速度图,则理论塔板高度随流速的增大而迅速减小。当流速较低时,传质起主要作用,理论塔板高度增大。在高效液相色谱仪中,流动速率受影响较小,但在凝胶过滤色谱中,由于物质必须渗透到凝胶中,传质有很大的影响,流速降低了柱的效率。

5、固定相颗粒尺寸

相制备的颗粒越小,柱的效率越高,并且流动相的流动阻力越大,使其流动所需的压力就越大。