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用高效液相色谱法检测维生素的方法

发布时间:2019-07-20 13:58:46 作者:

用高效液相色谱法检测维生素的方法

01 维生素分析原理

直到上世纪90年代初,碳水化合物、蛋白质、脂质、矿物质和水被认为是正常生长、发育和生存所必需的唯一膳食成分。然而,只吃上述饮食的动物通常会异常生长,例如发育不良和发育不良,或死于明显营养不良。

1912年,波兰科学家C.funk将这些特殊营养素命名为“维生素”,其中“vita”表示生活在拉丁语中,“胺”来源于从稻壳中分离出的硫胺素化合物。然而,其他科学家后来发现,所有维生素都不含胺,最终将维生素缩短为维生素。删除维生素的最后一个字母“e”。这是维生素第一次被命名。随着分析科学和医学技术的发展,已经发现了越来越多的维生素。人们开始用字母来区分不同的维生素。维生素A,维生素B1等名称已经出现。

有两种维生素是水溶性维生素和脂溶性维生素,水溶性维生素溶于水,不溶于非极性有机溶剂.吸收后,它们在体内储存较少,排泄过多的尿液。水溶性维生素有,维生素B1,核黄素,维生素B2、烟酸、维生素B6,生物素等维生素维生素C等等,脂溶性维生素可溶于非极性有机溶剂,但不可溶于水。它们可以被吸收并与脂肪一起储存在体内。排泄率不高,脂溶性维生素有维生素A、维生素D等等。

02 维生素分析系统

维生素分析系统是分析水溶性和脂溶性维生素的专用分析仪。维生素不能由我们人体合成,所以它们通常是从外部来源获得的,我们吃的食物,维生素是不稳定的化合物,在样品制备过程中容易氧化和破坏。因此,有必要建立一种简便的方法来减少维生素的降解,从而得到准确的结果。

通常,用分光度法和微生物法分析维生素,由于样品制备过程复杂,过程长,重复性差。近年来,由于高效液相色谱法(HPLC)在维生素分析中的应用,克服了上述问题,结果准确、重复性好。

03样品制备程序


水溶性维生素的样品制备程序

样品100g

加入100毫升纯净水,使其均化10分钟

用磷酸将ph值调整为4.5

加入250毫克菠萝蛋白酶或蛋白酶,加入2.0克α-淀粉酶

将样品保持在45°C下3小时

将温度降至室温

加入10ml20%磷酸沉淀蛋白质

每分钟10,000转,在5°C离心30分钟

重复三次蛋白质沉淀过程,加入纯水,使样品溶液达到100毫升。

通过已用5.0ml甲醇洗涤的C18 Sep-pak柱过滤样品

用7.0 ml 1%磷酸和10.0 ml 0.1 N NaOH和3.0 ml甲醇:纯水(1:1)溶液冲洗收集柱状液体。

收集所有溶液并将样品溶液加入100ml

0.25μm滤膜对样品的过滤

取10μl样品加入高效液相色谱法。

脂溶性维生素样品制备方法

样品 10g

向样品中加入75毫升70%乙醇、25毫升17N氢氧化钠和0.5克抗坏血酸。

用氮气保护,在黑暗中放置一夜(约8-16小时)。

用正己烷萃取样品

用水冲洗样品直至达到pH 7.0(通过添加pp检查溶液)

样品经SEP-PAK(氧化铝、二氧化硅、C18)柱后用乙腈萃取。

将样品的最终体积定容为10ml

样品的高效液相色谱分析