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高效液相色谱仪正确配置流动相的要点

发布时间:2019-07-31 09:10:38 作者:

1.高效液相色谱仪的分离原理主要取决于流动相和固定相的吸附和解吸。流动相的正确配置对实验数据和分离效果至关重要。首先,流动相构型中应注意的问题-一般情况下,溶剂的混合是根据体积比(V≤V)或重量比(W≤W)进行的。溶液的体积随温度的变化而变化,因此根据重量比混合流动相。样品测定的重复性好,但操作繁琐,通常是体积混合。有三种方式的体积混合,如50%乙腈水溶液:

模式(1):你可以采取500毫升的乙腈和500毫升的水在一个水箱,这两种液体可以充分摇匀和混合在瓶中。

方法(2):取500ml乙腈于1L容量瓶中,用水固定。

方法(3):先将500 ml水放入1L瓶中,再用乙腈固定体积,通常建议在模式(1)中配置移动阶段。

2.高效液相色谱仪的色谱法所需的甲醇、乙腈等试剂必须为色谱纯级。其他试剂也应尽可能为色谱纯级。试剂标签上应标明色谱等级或高效液相色谱字样,水必须是超纯水或直接购买质量保证纯净水.

3.当高效液相色谱仪反相色谱法将流动相的pH值调整为分离弱酸(3<pka<7)或弱碱(7<pka<8)时,通过调整流动相的pH值来抑制样品组分的分离,增加了组分在固定相上的保留,提高了样品的稳定性。d采用反相离子抑制技术改善了峰形。

主要结果如下:

(1)对于弱酸,流动相的pH值越小,组分的k值越大。当pH值远低于弱酸的PKA值时,弱酸主要以分子形式存在。在分析弱酸样品时,通常在流动相中加入少量的弱酸,通常使用50 mmol/L磷酸盐缓冲液和1%醋酸溶液。

(2)对于软弱地基,则相反。在弱碱样品的分析中,通常会在流动相中加入少量的弱碱。常用50 mmol/L磷酸盐缓冲液和30 mmol/L三乙胺溶液,因此,在这种情况下,有机胺(如三乙胺)也被称为去尾剂或清除剂。

(3)含缓冲盐的流动相的制备和缓冲盐中盐试剂的使用也应尽可能使用高效液相色谱仪的色谱纯度,称重应准确。为了满足要求,在日常使用前,应选择合适的天平,并对天平进行校准。按要求配置后,必须用0.4 5μm或0.2 2μm滤膜过滤,超声波除气2 0 min以上。注:缓冲盐应为新制备的。