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高效液相色谱仪选择缓冲盐需要注意的事项

发布时间:2019-08-05 14:20:40 作者:

在高效液相色谱仪(HPLC)中,酸或碱缓冲溶液的分离对于保持流动相的恒定pH是非常重要的,并且提高保留时间的再现性。首先,如何选择缓冲溶液:pka和缓冲容量、溶解性、紫外吸收率(使用紫外检测器)、挥发性(MS蒸发光散射检测器)、离子对性能、稳定性和仪器兼容性。


一.根据上述理论,流动相的缓冲能力取决于缓冲盐的pka,缓冲液浓度和流动相的ph。

二.当缓冲液中溶质的两种形式(HA和A)的浓度相等时,即缓冲盐的PKA等于流动相的pH时,缓冲容量最大,高效液相色谱仪的流动相pH值与缓冲盐的pKa值相差越大,缓冲盐的缓冲能力越小。因此缓冲的pKa和流动相的pH不大于约1.0单位。高效液相色谱仪中流动相的缓冲容量一般与缓冲液的浓度成正比,通常在5-25毫摩尔/升范围内。在反相色谱过程中,尤其是当流动相缓冲液浓度较低或进样量较大时,可避免流动相溶解样品的缓冲能力。

三.当高效液相色谱仪的缓冲容量较低时,可以从以下几个方面调整缓冲容量:

1.降低缓冲液pka和流动相ph(可调ph或更换缓冲液)之间的差异

2.矿石大流动相ph与溶质pka之间的差异(当差异足够大时,溶质将完全电离或保持非电离状态)。

3.增加缓冲液浓度

4.减少样品体积

5.调整样品的酸碱度使其与流动相一致。