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注意!高效液相色谱仪的心脏色谱柱使用的七大误区

发布时间:2019-08-06 09:43:37 作者:

高效液相色谱仪的色谱柱在色谱分析系统中起着分离的作用,是色谱分析核心组成部分。色谱柱的正确使用和维护尤为重要,使用不当会降低色谱柱的效率,缩短使用寿命,甚至造成损坏。本文从七个方面简要介绍了液相色谱柱使用中应注意的问题。

1.避免压力和温度的突变或柱体从高处落下会影响柱体的填充状态;柱体压力的突然升高或降低也会促使柱体的填充,因此应缓慢调整流速以保持填充柱的稳定性。

2.为了避免在需要改变样品溶液的组成时直接改变溶剂的组成,溶剂的组成应当逐渐改变,特别是在反相层析中,而不是直接从有机溶剂到所有水,反之亦然。当用二次洗脱能力强的洗脱液洗涤柱时,流动相在对流系统中的位移应逐渐被混相溶剂所改变。每个流动相的体积约为柱体积的20倍,即常规分析需要50-75毫升。

3.为了避免柱反冲,柱不能反向冲洗,且在本说明书中仅使用高效液相色谱仪的色谱柱,以指示柱可用于反冲洗以除去留在柱上的杂质。否则,反冲洗塔的作用就是迅速降低塔效率。

4.为了避免使用流动相和破坏固定相,使用适当的流动相(特别是pH)来避免固定相损坏。有时可以在采样器前面连接预柱。当分析柱与硅胶键合时,柱前为硅胶,在进入分析柱之前,硅胶可使流动相“饱和”,从而避免硅胶基质在分析柱中溶解。

5不经样品处理,禁止直接进入高效液相色谱仪的色谱柱,使基体的复杂样品,特别是生物样品直接注入柱内,样品需要预处理,样品注射器与高效液相色谱仪的色谱柱之间连接保护柱。高效液相色谱仪的保护柱通常是填充有类似固定相的短柱。

6.禁止在高效液相色谱仪的色谱柱中长期存放缓冲液。柱内填充乙腈或甲醇。应拧紧柱接头,以防溶剂蒸发和干燥。

7.色谱柱使用后,禁止用适当的溶剂清洗。例如,ODS柱用甲醇洗涤至基线平衡,用盐缓冲液作流动相时,使用后用无盐流动相洗涤,可使用含卤化合物(氟、氯、溴)。腐蚀的不锈钢管不应长期接触;安装在液相色谱中的色谱柱应每4-5天开启一次,如果不经常使用,应冲洗15分钟。