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如何判断高效液相色谱仪何时应更换新柱

发布时间:2019-08-20 14:40:39 作者:

如何判断高效液相色谱仪何时应更换新柱?色谱工作者经常遇到这样的问题。应该何时更改列?列中的列数是否可以反映列的状态?根据经验确定色谱柱应“退役”的标准,当色谱柱中的色板数减少到新色谱柱的百分比时,您可以认为该色谱柱不能再使用。您如何判断您的实验室中不再使用色谱柱?什么?


   据信,每个色谱工作者都关心分辨率。分辨率是色谱柱分离特定样品的指标。色谱的核心任务是分离每个峰。在实践中,我们需要获得具有合理峰宽的窄峰以获得较低的检测限(这不再是问题,现在该柱可以满足该要求)。更好的方法是使用压力 分辨率和峰形的混合索引来检查列的状态。压力测量是最简单的,通常我们确定色谱方法以满足以下要求:使用新色谱柱时,色谱柱压力不高于2500 psi,并且在任何情况下压力都不超过3000 psi。虽然现代液相色谱系统可以在更高的压力下使用,但由于高压导致的系统损失和泄漏问题可能非常严重。当压力超过3000 psi时,请考虑更换进样器和色谱柱之间的0.5 mm孔径在线过滤器。如果更换过滤器后压力仍然很高,则色谱柱的过滤器或色谱柱已经被污染,这会提示我们更换高效液相色谱仪中的色谱柱。统计显示,超过60%的柱损坏是由于压力过大造成的。分辨率是我们调查该专栏的一个非常重要的指标。只要两种成分可以与基线分离,分析物的定量就没有问题。对于对称高斯峰,分辨率为1.5会导致基线分离;如果Rs介于1.7和2.0之间,那就更好了。如果峰尾严重,则需要更高的分辨率。使用分辨率作为色谱柱基准的好处是我们可以直观地看到相邻色谱柱的分离。检查高效液相色谱仪中的色谱柱质量的另一个标准是峰拖尾。制造商的测试报告的峰形非常漂亮,但这并不意味着该列分析实际样品。实际样本始终包含导致峰值拖尾或多或少的组件。值得一提的是,含有氮原子的化合物与硅胶骨架上的游离硅烷醇基团非常紧密地结合。

  由于高效液相色谱仪中的色谱柱使用较长时间,键合相会丢失,拖尾会更严重。但是,随着分辨率的变化,拖尾情况的变化并不会立即显现出来。基于此,最好设定拖尾因子的上限,例如美国药典规定拖尾因子不超过1.8。确定“丢弃”标准列的最佳时机是我们开发分析方法或方法验证时。通常,在开发分析方法期间,您将测试多个高效液相色谱仪中的色谱柱并分析足够的实际样品。你知道当分离恶化时会发生什么。一开始使用范围很广。经验:如果您在开始时收紧系统适用性要求,则在认证方法后很难放宽此要求。在分析实际样品之前进行系统适用性检查,以确保色谱方法符合分析人员可接受的标准。