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液相色谱仪中高效液相色谱柱的管理及维护

发布时间:2019-09-03 13:32:02 作者:

高效液相色谱柱的管理

列管理

制定并严格执行色谱柱管理的标准操作程序每个新采购的色谱柱必须登记包括:生产公司、商品名称、型号、规格、采购时间、启动时间、单价、柱保护液等。柱的分类和储存、硅胶柱、化学键合硅胶柱、氰化物或氨基柱、离子交换树脂柱和凝胶柱各使用一个柱盒,并在柱盒上标明类别。

装在带有列说明的小袋子里,并附在登记簿上。对于每个激活的列,用激活日期标记该列。

每个色谱柱每两个月维护一次,特别是对于一些不常使用的色谱柱,因为放置时间长,容易干燥,每次都要做维护记录。

对于失败的支柱,记录停止使用它们。它们不能随意丢弃。它们是专门储存的。如果需要填充现有支柱,可以使用存储支柱的填充。在生产单位质检部门,可以利用时间长、效率低的色谱柱检测产品的中间体。

色谱柱的维护

色谱柱使用一段时间后,经常会遇到色谱柱被污染的情况,色谱柱效率会有一定程度的降低。适当的色谱柱保护方法可以延长色谱柱的使用寿命。

样品和流动相的处理

注射前用滤膜过滤溶解的样品,以去除不溶物质。如有必要,需对样品进行预处理。如果流动相中存在不纯物质,柱效率将受到影响,因此溶剂应为色谱级,至少是分析级,流动相在使用前应使用微孔膜过滤。

在流动相输液管前安装过滤器过滤器定期用甲醇超声波清洗。如果效果不好,可以用10%稀硝酸浸泡清洗。对于堵塞严重的过滤器,清洗前可在火焰上燃烧。

保护柱(柱前)的使用:

对于更昂贵的色谱柱,可以在色谱柱前添加保护柱,以防止样品中的杂质污染分析柱。对于制备柱,保护柱的使用尤其重要,因为其注射体积大。

一般治疗:

硅胶,氧化铝和凝胶色谱柱每次使用后用低流速和二氯甲烷或正己烷等长期溶剂洗涤; 键合相硅胶色谱柱,离子交换色谱柱和凝胶色谱柱先用蒸馏水洗涤,再用甲醇洗涤,然后用甲醇和蒸馏水按一定比例洗涤溶液,再过夜..

对于已使用一段时间且效率降低的塔,可采用以下方法进行再生。

再生包括活化(右/左)和纯化(左/右)硅胶、氧化铝和极性键合相色谱柱按以下顺序洗涤:三甲基戊烷或己烷三氯乙烷-乙酸乙酯-丙酮-乙醇-水硅胶柱:蒸馏水和甲醇(洗涤时可加入少量二甲基胺)。

离子交换树脂柱:

高浓度氯化钠溶液(1-2摩尔氯化钠溶液)可以再生大部分树脂。一些与树脂紧密结合的物质,如油脂,可以用低浓度碱溶液(如0.1毫升氢氧化钠溶液)洗涤。吸附在固定相上的酸性有机物质用低酸碱度缓冲溶液洗涤,碱性有机物质用高酸碱度缓冲溶液洗涤,然后用蒸馏水←甲醇←二氯甲烷←甲醇←蒸馏水洗涤。

凝胶柱:

因为凝胶色谱柱根据待分离物质的分子量来分离物质,所以通常使用稀氢氧化钠或非离子洗涤剂(0.2%-1%NP-40或Lubrol)来洗掉大部分结合物质。如果某些污染物不能去除,用24%或30%乙腈洗涤过夜以去除疏水蛋白,用30%-50%乙酸去除亲水蛋白,用蛋白水解酶处理可分解凝胶中残留的微量胃蛋白酶,然后用蒸馏水←甲醇←蒸馏水洗涤。

污染色谱柱的处理:

流动相或样品中的不溶性物质由于强烈的物质污染而沉积在柱头上,可通过以下方法洗涤:去除脂质可用四氢呋喃、乙腈或甲醇洗涤;蛋白质的去除可以通过用乙腈、丙醇和1%三氯乙酸梯度洗脱来进行。当重复注入100-200毫升四氢呋喃时,一些高度疏水的化合物可以用乙腈或甲醇洗脱。

耻辱治疗:

如果柱头堵塞和污染严重,无效色谱柱用溶剂冲洗,只需打开色谱柱,除去塔顶填料并重新组装:首先,除去不锈钢烧结过滤器,检查色谱柱床,常见的凹陷或污染的有色填料,除去不规则床层和有色填料,使色谱柱床变白并完全水平,然后使用甲醇作为糊状填料匀浆,将糊状填料匀浆滴在色谱柱上,并在重力作用下从匀浆中排出甲醇溶液,重复上述步骤,直至填料水平。

列的存储:

首先,色谱柱在储存前必须清洗干净。色谱柱不能储存在水或水性溶剂中,否则会导致微生物生长。

极性色谱柱可以用合适的溶剂如二氯甲烷洗涤。用甲醇洗涤键合相色谱柱;阴离子交换色谱柱用0.002%氯己定(双氯苯双胍己烷)的缓冲溶液洗涤,阳离子交换色谱柱用0.005%硫柳汞缓冲溶液洗涤。向凝胶色谱柱的缓冲溶液中加入0.02%叠氮化钠,或用20%乙醇冲洗。塔的两端是密封的,以防止溶剂蒸发干燥塔并引起塔结构的几何变化。